怎樣檢測(cè)黃曲霉素
黃曲霉素主要是一類真菌毒素,主要是由黃曲霉、寄生曲霉和集峰曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素(AFT)是迄今發(fā)現(xiàn)的霉菌毒素中毒性最大、對(duì)人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素,有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多種形式,它們存在于土壤、動(dòng)植物、各種堅(jiān)果中,特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品,對(duì)人和動(dòng)物有強(qiáng)烈的毒性。
黃曲霉素檢測(cè)最初以薄層層析法為主,發(fā)展到高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應(yīng)用,其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測(cè)手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應(yīng)用,為黃曲霉毒素的檢測(cè)提供了更廣泛的選擇余地,適應(yīng)了不同的檢測(cè)目的和要求。
通過這些方法都可以明確是否有黃曲霉毒素,黃曲霉素的高毒性對(duì)人類的健康危害極大,所以必須嚴(yán)格控制農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉素的含量,保證食品的安全。
薄層分析法(TLC)
TLC法是檢測(cè)黃曲霉素最為經(jīng)典的方法,也是以前最為常用的方法,至今仍為一些檢測(cè)機(jī)構(gòu)所用,也是一種國(guó)標(biāo)方法。其原理是針對(duì)不同的試樣,用適宜的萃取溶劑將黃曲霉素從試樣中萃取出來(lái),經(jīng)柱層析凈化后,再在薄板上展開后分離。利用黃曲霉素的熒光特性,根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱與標(biāo)準(zhǔn)比較確定其含量,對(duì)于一些組分很復(fù)雜的試樣要雙向展開,才能獲得較高的靈敏度。
TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單,檢測(cè)費(fèi)用低,但操作繁瑣、費(fèi)時(shí),萃取和凈化效果不理想,靈敏度差,對(duì)操作人員的身體健康存在較大程度的危害。
液相色譜法(HPLC)
液相色譜法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)黃曲霉毒素的方法,主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè),這一檢測(cè)方法將化學(xué)分析與領(lǐng)先的計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合,使自動(dòng)化程度得到極大提高,在實(shí)驗(yàn)空間、人力和儀器都保持不變的情況下,能檢測(cè)更多的樣品。其原理是根據(jù)衍生后的黃曲霉毒素在固定相和流動(dòng)相之間的分配量不同,從而達(dá)到分離的目的,分離后的黃曲霉毒素能發(fā)射特征性熒光,被熒光檢測(cè)器捕獲后得到檢測(cè)。該方法既可采用正相色譜也可采用反相色譜。正相色譜中固定相一般使用硅膠柱,流動(dòng)相使用以50%水飽和的三氯甲烷:環(huán)己烷:乙腈:乙醇。反相色譜固定相為C18,流動(dòng)相為乙酸:乙腈:異丙醇:水(1∶5∶5∶39)。
該法能準(zhǔn)確地分離不同種類的黃曲霉素(例如:AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等),檢測(cè)速度快且定性與定量準(zhǔn)確,檢測(cè)限低,可作為仲裁法使用,但儀器設(shè)備價(jià)格昂貴,前處理方法相對(duì)繁瑣,若用到免疫親和柱則會(huì)使試樣檢測(cè)費(fèi)用增加,對(duì)操作人員的身體健康仍存在一定的危害。
酶聯(lián)免疫法(ELISA)
ELISA法也是近年來(lái)研究開發(fā)出來(lái)的一種較為新穎的方法。ELISA 法測(cè)定黃曲霉毒素時(shí)主要采用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法,原理是將黃曲霉毒素的特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應(yīng)板的孔穴中,再加入待測(cè)樣品及酶標(biāo)已知抗原,兩者與特異性抗體進(jìn)行免疫競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),然后加入酶底物顯色,利用酶標(biāo)儀根據(jù)顯色反應(yīng)顏色的深淺進(jìn)行定量。
該方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,操作簡(jiǎn)便,所涉及儀器及試劑比較少,回收率高,實(shí)驗(yàn)步驟也比較簡(jiǎn)單,是目前國(guó)內(nèi)外較為先進(jìn)的黃曲霉毒素檢測(cè)方法。但抗體壽命短且需要低溫保存,測(cè)定時(shí)假陽(yáng)性率比較高,適合于大量樣品的篩查。
金標(biāo)試紙法
金標(biāo)試紙法,實(shí)際就是一種固相免疫分析法。其原理是利用抗體與抗原的特異性結(jié)合反應(yīng),可一步檢測(cè)黃曲霉素。
該法可在5~10 min內(nèi)完成對(duì)試樣中黃曲霉素的定性測(cè)定,具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn),且無(wú)須其他儀器設(shè)備的配合,既可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行檢測(cè),也可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地測(cè)定,但是其檢測(cè)的準(zhǔn)確度、精度有待進(jìn)一步的研究。
熒光定量檢測(cè)法
南京微測(cè)熒光定量FPOCT快速檢測(cè)技術(shù)平臺(tái),具有靈敏度高、定量范圍寬、準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、操作快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),正逐步替代膠體金試紙條和酶免試劑盒等傳統(tǒng)快速檢測(cè)產(chǎn)品,引領(lǐng)全球食品安全和動(dòng)物疾病快速檢測(cè)從粗略定性到準(zhǔn)確定量的升級(jí)換代。
由于熒光定量檢測(cè)技術(shù)具有檢測(cè)精度高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、方便攜帶和適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),因此各糧油食品飼料加工企業(yè)都開始逐步使用熒光定量黃曲霉毒素快速檢測(cè)儀設(shè)備用于黃曲霉檢測(cè)。